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牡丹油体提取及其稳定性研究(2)
油体在4 ℃下储存两周的稳定性比较:将利用两种方法提取出的牡丹油体均放入4 ℃的冰箱中储存,两周后取出,将其置于玻片中并观察、比较其显微结构。
油体蛋白SDS-PAGE检测:取两种方法提取出的牡丹油体样品各20 μL于EP管内,向其中加入20 μL去离子水后再加入10 μL的5 × Loading buffer,混合均匀后于沸水中煮10 min,制备12%的SDS-PAGE液。蛋白样品经上样缓冲液处理后在每孔中加样10 μL,用12%分离胶进行SDS-PAGE电泳分离,每块胶的初始电流强度为20 mA,10 min后改为60 mA,当样品达到胶板底部时结束电泳,用考马斯亮蓝G250染色2 h后脱色拍照观察。
1.3.3 油体的稳定性研究
取新提取的油体2 mL,分别进行不同温度和pH值条件下的处理。将量取的油体部分置于50、70、90 ℃的水浴锅内水浴加热30 min,另一部分置于用0.1 mol/L HCl或0.1 mol/L NaOH调节的pH值为5.0、7.0、9.0、11.0的样品中,处理结束后观察其显微结构。
取新提取的油体20 mL,分别用10 mmol/L磷酸盐缓冲溶液(pH=7.0)和去离子水(pH=7.0)1∶5稀释混匀,取前者稀释过的溶液10 mL依次加入50、100、150、200 mmol/L的NaCl,取后者稀释后的溶液10 mL以25、50、70、100 mmol/L梯度的糖浓度制备油体悬浮液,后观察其显微结构。
2 结果与分析
2.1 油体提取方法的比较
2.1.1 油体外观和提取率
从外观上看,两种方法提取的油体均呈透明状态,差异不大。但从提取率上来看,分级法提取油体的提取率仅为10.25%,比优化法的提取率低了12.38%。
2.1.2 油体显微结构及其在4 ℃储存2周后的稳定性
通过对油体的显微结构观察可以发现,两种方法提取的油体在提取初期都是大小均一、分散均匀、杂质较少、密度大;但将油体在4 ℃储存2周后,分级法提取的油体出现了大幅度的聚合和皱缩,而优化法提取的油体除少部分粒径增大外仍然能够保持相对较好的稳定性(图1)。
注:a为分级法提取油体的显微结构;b为分级法提取油体在4 ℃储存2周后的显微结构;c为优化法提取油体的显微结构;d为优化法提取油体在4 ℃储存2周后的显微结构。图1 油体的显微结构及其在4 ℃储存2周后的稳定性
2.1.3 油体的SDS-PAGE电泳检测
对两种方法提取的油体进行SDS-PAGE电泳检测,发现2种提取方法对油体中所含的蛋白质种类没有影响,但与分级法相比,优化法提取油体的条带颜色显著较深(图2)。
注:M为蛋白marker;1为分级法;2为优化法。图2 两种方法提取油体的SDS-PAGE电泳检测
通过对上述油体相关指标的综合比较,可以发现优化法提取的牡丹油体相对较好,下面将采用优化法提取油体进行稳定性研究。
2.2 油体的稳定性研究
2.2.1 不同温度对油体稳定性的影响
图3为50、70、90 ℃条件下的牡丹油体,通过观察可以发现,随着温度的升高,油体出现了不同程度地破裂,但总体上油体依然分散均匀、密度大,杂质也较少、大小均一。
图3 不同温度条件下油体的稳定性
2.2.2 不同pH对油体稳定性的影响
由图4可知,当pH值为5.0和7.0 时,显微镜下的油体粒径相比pH值为9.0和11.0时要明显增大,油体有显著聚集现象,形状不规则均一,甚至存在部分破裂,稳定性显著下降;当pH值为9.0和11.0时,油体粒径基本不变,显微镜下仅有少数油体聚集,油体较稳定。
图4 不同pH条件下油体的稳定性
2.2.3 不同NaCl浓度对油体稳定性的影响
由图5可知,牡丹油体的结构及粒径随着NaCl浓度的变化而发生改变。当NaCl浓度为50 mmol/L时,相较于图2中未经NaCl处理的牡丹油体,其显微结构没有发生明显地变化。当NaCl浓度在100~200 mmol/L时,牡丹油体的粒径随着浓度的增加而变大,油体也逐渐开始聚集和破裂,当NaCl浓度增加到200 mmol/L时,牡丹油体已经大面积的破裂和聚集,油体大小不均一,杂质极多,稳定性显著降低。
图5 不同NaCl浓度条件下油体的稳定性
2.2.4 不同糖浓度对油体稳定性的影响
图6显示牡丹油体的稳定性与糖浓度关系密切。当糖浓度为25 mmol/L时,牡丹油体的结构和粒径没有发生明显地变化,当糖浓度为50 mmol/L时,牡丹油体开始出现小部分的破裂,油体粒径变大,大小不太均一,当浓度增加到70~100 mmol/L时,牡丹油体大面积破裂和聚集的现象显著,相较于未处理过的油体,100 mmol/L糖浓度的牡丹油体中出现了超大油体,大小极不均一,杂质极多,稳定性显著下降。
文章来源:《牡丹》 网址: http://www.mdzzs.cn/qikandaodu/2021/0415/1697.html
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